Apicomplexan paraziták rhoptry organellái

apicomplexan paraziták rhoptry organellái

Itt kombináljuk a globális foszfo-proteomikai elemzést a kinome-szerű fordított genetikával, hogy értékeljük a fehérje-foszforiláció fontosságát a Plasmodium falciparum asexual proliferációjában. Számos parazitafehérje-kináz önmagában foszforilálódik feltételezett szabályozói maradékokon, beleértve a PfGSK3 és a PfCLK3 aktivációs hurok tirozinjait is; kimutattuk, hogy a PfCLK3 Y foszforilációja elengedhetetlen a teljes kináz aktivitáshoz.

A kinome-szerű fordított genetikai stratégia 36 apicomplexan paraziták rhoptry organellái kinázt azonosított az eritrocitás schizogónia szempontjából. Ezek a vizsgálatok nemcsak a fehérje-foszforiláció által szabályozott folyamatokat tárják fel, hanem meghatározzák a maláriaellenes gyógyszerek lehetséges célpontjait a parazita kinomán belül.

Bevezetés A malária évente még több mint 1 millió embert öl meg, és a morbiditás forrása, amely komoly akadályt jelent számos második és apicomplexan paraziták rhoptry organellái ország társadalmi és gazdasági fejlődésében 1. Meglepő módon, annak ellenére, hogy a fehérje-foszforiláció egy univerzális apicomplexan paraziták rhoptry organellái mechanizmus, amelyet számos humán betegségben gyógyszeres célpontként mutatnak be, a maláriaparaziták nagyrészt eltérő fehérje-kinázjainak és foszfó-jelző kaszkádjainak megcélzásának lehetősége 2, 3.

Ennek az elhanyagolásnak az egyik tényezője az, hogy a foszforiláció szerepét a Plasmodium falciparum legvirulensebb humán maláriaparazitájának biológiájában a foszforiláció szerepével kapcsolatban komolyan kevés. Két független genomi elemzés azonosította a P.

Ebben a tekintetben a malária és a humán kinomok hasonlóak, mivel nagy és változatos géncsaládok, amelyek természetesen a humán kinome esetében több szabályozási módot és változatos sejtalapokat képeznek. Az általános hasonlóság ellenére azonban a malária és paraziták a gyomorban emlős fehérje kinázok közötti szekvenciahomológia sok esetben korlátozott, és ennek következtében számos Plasmodium protein kináz nem rendelkezik ortológokkal az emberi gazdaszervezetben.

Ezek közé tartoznak a kalciumfüggő kinázok CDPK-kamelyek szorosan hasonlítanak a növényi kinázokra, ahol a kináz-domén egy 7- es kalodulin-szerű doménhez, valamint a P. Továbbá, a P. Az emberi és maláriális kinomák közötti jelentős filogenetikai sokféleség alapját képezheti a malária-kinome 2 szelektív célzásának.

Bár ez egy vonzó fogalom, nagyon kevés információ áll rendelkezésre a fehérje-foszforiláció szerepéről a Plasmodium biológiában, és ezért nehéz megjósolni a malária-kinázokra és foszforilációs útvonalakra ható gyógyszerek potenciális hatékonyságát és sejt-hatásait.

Ebben a fényben kombináltuk a kinome-kiterjedő gén knockout és fordított genetikát a globális foszfoproteomikával, hogy megvizsgáljuk a fehérje foszforiláció fontosságát P.

Vizsgálataink azt mutatják, hogy a P.

Ez a meglepő redundanciahiány nemcsak az egyes fehérje-kinázok kulcsfontosságú szerepére, hanem a maláriaellenes protein-kináz-célpontok potenciálisan bőséges forrásaira is utal. Az, hogy ezek a fehérje-kinázok a biológiai aktivitások sokféleségét szabályozzák, a foszfoproteóma természete nyilvánvalóvá válik, amelyre itt utalunk, hogy számos olyan kulcsfontosságú folyamatban szerepet játszó fehérjéket tartalmaz, mint a vörösvérsejtekbe történő invázió, apicomplexan paraziták rhoptry organellái, transzkripció és DNS-replikáció.

A maláriaparazitákban a fehérje-foszforiláció komplexitását hangsúlyozta továbbá, hogy a klasszikus apicomplexan paraziták rhoptry organellái hiánya ellenére a P.

Eredmények Kinome-szerte fordított genetika P.

Ezt homológ rekombinációval, egyetlen keresztezett gén-zavaró stratégiával S1-S3 kiegészítő ábrák sikerült elérni. A KO vektor integrációját 27 ePK gén hosszabb ideig tartó legalább 90 napos tenyésztése után nem figyeltük meg, ami azt jelzi, hogy az ezen gének által kódolt enzimek valószínűleg kulcsfontosságú szerepet játszanak a parazita aszeksuális proliferációban 1. E 27 lókusz többségének 22 esetében külön-külön transzfektáltuk a 3D7 parazitákat jelölő vektorokkal, amelyek C-terminális tag hemagglutinin, Myc vagy zöld fluoreszcens fehérje elhelyezésére lettek kialakítva az ePK kódolási szekvenciával kiegészítő ábra S1.

metagenics méregtelenítés kiegészítők

Ezt a komplementációs megközelítést most alkalmazhatjuk ezen enzimek részletes funkcionális vizsgálatára, például a komplementáló gén specifikus mutációinak hatását vizsgálva, nevezetesen a gatekeeper maradék mutációkat, amelyek túlérzékenyek a terjedelmes gátlókkal szemben lásd alább.

Teljes méretű asztal Összességében a címkézési és komplementációs megközelítések erőteljesen utalnak arra, hogy 22 ePK esetében a KO vektor integrációjának hiánya nem a rekombináció lokusz refraktivitása, hanem valószínűleg annak köszönhető, hogy ezek az ePK-k kulcsfontosságú szerepet játszanak az eritrocita asexual ciklusban, a malária patogenezisért felelős folyamat.

Ezért a jelen tanulmány 25 olyan ePK-k számát mutatja, amelyek nagy valószínűséggel kulcsfontosságú szerepet töltenek be a P. Ezzel szemben kimutattuk, hogy a KO vektor integrálódik a 32 ePK gén lokuszába.

Она прилетела за. Ангел заговорил: - Дэвид, я люблю .

Hat esetben jelezve az 1. Úgy véljük, hogy ezek a gének valószínűleg lényegesek; A klónozott populációk genotipizálása szükséges az ePK-gének e részhalmazának ezen értelmezésének validálásához. Ezen kinázok közül az egyik, a ciklikus AMP cAMP -függő kináz PfPKA, lényeges szerepet játszik továbbá az a megfigyelés, hogy a transzgénikus paraziták, amelyek mutáns cAMP-függő foszforilációs helyeket expresszálnak az apikális membrán antigén 1 fehérjében, jelentősen károsodnak.

Az invázió során történő szekréció után a RON4 L1 az MJ-hez kapcsolódik, és a gazdaszerkezet membránjának citoszolikus felületére irányul. RON4 L1 knock-out sejtvonalat hoztunk létre, és megmutattuk, hogy nem lényeges a vizes ciklusban, bár a mutáns paraziták kevésbé hatékonyan megölik az egereket. Bevezetés Az Apicomplexa paraziták felelősek az emberi és állati betegségekért. A patkány jelentős emberi patogéneket, például maláriaért felelős Plasmodium fajokat vagy Toxoplasma-t, a toxoplazmózis hatóanyagát tartalmazza.

Mindezek közül ben szilárdan meghatároztuk, hogy korlátozott hígítással megszakított lókuszú parazita klónokat kaptunk. Teljes méretű asztal Összefoglalva, az alapvető funkciók első értékelése azt mutatja, hogy a P.

Ezzel apicomplexan paraziták rhoptry organellái a 12 határozottan elengedhetetlen, amint azt az életképes parazita klónok bizonyítják, amelyekben a releváns gének inaktiválódnak a 2. Ez a folyamat foszfoproteint apicomplexan paraziták rhoptry organellái, amelyek közül 26 humán fehérje és parazita volt 1.

Összességében egyedi foszforilációs helyet azonosítottunk, amelyek túlnyomó többsége a parazita által kódolt fehérjéknél történt 1b. Az ezekben az elterjedt lemezekben bemutatott foszfo-peptideket apicomplexan paraziták rhoptry organellái vizsgált hat biológiai replikáció közül legalább kettőben figyelték meg, és egyedi foszfo-peptid teljes adatsorából származtak, amelyeket szigorú kritériumok alapján szűrtek ki, beleértve a számítási elemzést és a kézi ellenőrzést.

Ezt a protokollt hat biológiai replikáción végeztük, hogy létrehozzuk az ebben az ábrában összefoglalt foszforilációs helyek listáját, és részletesen ismertettük az 1-es és 2-es kiegészítő adatokat ACN; acetonitril, IMAC; immobilizált fém affinitáskromatográfia, Ti02; titán-dioxid.

apicomplexan paraziták rhoptry organellái férgek a szemkezelésben

A gén ontológia leképezést és további megjegyzéseket az alapértelmezett Blast2GO paraméterekkel végeztük. Teljes méretű kép Az általános celluláris aktivitásokban szerepet játszó foszfoproteinek, például az anyagcsere, a DNS-replikáció és a gén-transzkripció 1b. Ábra azonosításán túl sok foszfoproteint is társítottak parazita-specifikus folyamatokhoz, például cyto-adhézióhoz pl.

A vörösvérsejtekbe történő parazita invázió egy komplex folyamat, amely magában foglalja a merozoita kötődését, az újraszervezését, a merozoit bevonófehérjék eloszlását és az önmagában történő inváziót Ábra, 3.

A RhopH komplex részeként felépített egyik Rhoptry fehérje, a 3. Ez az ellenanyag a foszfo-CLAG 3.

hogyan lehet eltávolítani férgeket egy tinédzserben

Egy nemrégiben közzétett jelentés, amely a CLAG3. Frakciókból származó eredményeket az RQ oszlop elúciója mutatja.

Очень. Двухцветный застыл на месте и зашелся в истерическом хохоте. - Ты хочешь сказать, что это уродливое дерьмовое колечко принадлежит. Глаза Беккера расширились. - Ты его .

A kontroll mintákat nem kezeltük foszfatázzal. A frakciót ezután az anti-foszfo-CLAG 3.

A foszfo-CLAG 3. A mintákat 4, 6-diamidinofenil-indollal kék festettük a magok jelölésére. A skála sávja 2 μM. A bemutatott kísérletek legalább három független kísérletet reprezentálnak. Teljes méretű kép Teljes méretű asztal Aktiválási hurok parazita protein kinázok treonin foszforilációja A globális foszfo-proteomikus vizsgálat kimutatta, hogy legalább 23 protein-kináz foszfoprotein 4. Ezeket a foszforilációs helyeket dr.

Edwin Lasonder és Pietro Alano személyes kommunikáció által végzett foszfo-proteomiás vizsgálatban, valamint a PfPKA elleni anti-foszfó T antitestekkel és a PfPKG elleni anti-foszfó T antitestekkel végzett Western blot kísérletekkel igazoltuk kiegészítő ábra. A Pfcrket és Pfcrkt felfelé elhelyezkedő P.

féregkészítmények 1 5 éves gyermekek számára

A parazita protein kinázok aktivációs hurok tirozin foszforilációja Annak ellenére, hogy a P. Ábra, b.

Lásd még